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Cell Biolabs:Cas9蛋白ELISA检测试剂盒

发布者:艾美捷科技    发布时间:2021-10-27     
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CRISPR/Cas是机体长期进化形成的RNA指导的降解入侵病毒或噬菌体DNA的适应性免疫系统。根据Cas基因核心元件序列的不同,CRISPR/Cas免疫系统被分为3种类型:I型、Ⅱ型和Ⅲ型。I型和Ⅲ型CRISPR/Cas免疫系统需要多个Cas蛋白形成复合体切割DNA双链,而Ⅱ型CRISPR/Cas免疫系统只需要一个Cas9蛋白来切割DNA双链,目前Ⅱ型系统是被改造的最为成功的人工核酸酶。

 

CRISPR/Cas.jpg

 

Ⅱ型CRISPR/Cas免疫系统以Cas9蛋白和向导RNA为核心,其中Cas9蛋白是一种DNA内切酶,当短链外源DNA整合在CRISPR基因组中,转录加工成CRISPR RNA(CrRNA),这些CrRNA参与反式调控激活CrRNA(tracrRNAs),指导Cas9蛋白特异性位点剪切DNA。然而,最近有研究发现,这两种RNA可以被“改装”成一个向导RNA(single-guide RNA,SgRNA),可引导Cas9蛋白正确识别并切割特定序列,为CRISPR-Cas9基因编辑技术广泛应用奠定基础。因此,Cas9 蛋白作为一种基因组编辑工具在 DNA 中引起定点双链断裂,受到了全世界的关注。

 

如何快速有效的实现Cas9蛋白的定量检测,作为专业的生命科学医药原料供应商,Cell Biolabs中国区金牌代理,艾美捷科技为您推荐:Cas9蛋白ELISA检测试剂盒,实现Cas9蛋白的定量检测。

 

货号PRB-5079
名称Cas9 (CRISPR Associated Protein 9) ELISA Kit
Cas9蛋白ELSIA定量检测试剂盒
检测灵敏度酿脓链球菌的Cas9蛋白检测极限为1.5 ng/mL
实验原理本试剂盒用于测量各种细胞和组织裂解液样本中酿脓链球菌的Cas9蛋白的含量。试剂盒提供包被有抗Cas9蛋白抗体的96孔板,在使用该试剂盒的测定中,样品中的Cas9蛋白牢固且稳定地结合在孔上。然后加入生物素标记的Cas9蛋白检测抗体和显色剂进行识别并显色。Cas9的比例与吸光度的强度成比例。Cas9的绝对量可以通过与Cas9标准品进行比较来量化。
说明书

 

Cas9蛋白ELSIA定量检测试剂盒实验结果:

 Cas9标准曲线.png

1. Cas9标准曲线

 

转染的293细胞中检测Cas9.png

图2. 在转染的293细胞中检测Cas9。用Cas9哺乳动物表达载体瞬时转染细胞。48h后,细胞在RIPA缓冲液中裂解,测定Cas9蛋白浓度。用Cas9 ELISA试剂盒分别检测无细胞裂解液样本 (Neg)、存在50ng/mL Cas9蛋白(Pos)样本、转染对照(mock转染)蛋白裂解液以及Cas9转染的裂解液。


纯化的重组Cas9蛋白.png

图3. 纯化重组Cas9蛋白泳道1:SeeBlue Plus2 MW标准品;泳道2:重组Cas9。纯化的重组Cas9蛋白用作免疫原以产生ELISA抗体。

 

重组的Cas9蛋白的序列(下划线部分是Cas9蛋白全长):

MGSSHHHHHHSSGLVPRGSHMASMTGGQQMGRGSEFELRRQACGRMDKKYSIGLDIGTNSVGWAVITD EYKVPSKKFKVLGNTDRHSIKKNLIGALLFDSGETAEATRLKRTARRRYTRRKNRICYLQEIFSNEMA KVDDSFFHRLEESFLVEEDKKHERHPIFGNIVDEVAYHEKYPTIYHLRKKLVDSTDKADLRLIYLALA HMIKFRGHFLIEGDLNPDNSDVDKLFIQLVQTYNQLFEENPINASGVDAKAILSARLSKSRRLENLIA QLPGEKKNGLFGNLIALSLGLTPNFKSNFDLAEDAKLQLSKDTYDDDLDNLLAQIGDQYADLFLAAKN LSDAILLSDILRVNTEITKAPLSASMIKRYDEHHQDLTLLKALVRQQLPEKYKEIFFDQSKNGYAGYI DGGASQEEFYKFIKPILEKMDGTEELLVKLNREDLLRKQRTFDNGSIPHQIHLGELHAILRRQEDFYP FLKDNREKIEKILTFRIPYYVGPLARGNSRFAWMTRKSEETITPWNFEEVVDKGASAQSFIERMTNFD KNLPNEKVLPKHSLLYEYFTVYNELTKVKYVTEGMRKPAFLSGEQKKAIVDLLFKTNRKVTVKQLKED YFKKIECFDSVEISGVEDRFNASLGTYHDLLKIIKDKDFLDNEENEDILEDIVLTLTLFEDREMIEER LKTYAHLFDDKVMKQLKRRRYTGWGRLSRKLINGIRDKQSGKTILDFLKSDGFANRNFMQLIHDDSLT FKEDIQKAQVSGQGDSLHEHIANLAGSPAIKKGILQTVKVVDELVKVMGRHKPENIVIEMARENQTTQ KGQKNSRERMKRIEEGIKELGSQILKEHPVENTQLQNEKLYLYYLQNGRDMYVDQELDINRLSDYDVD HIVPQSFLKDDSIDNKVLTRSDKNRGKSDNVPSEEVVKKMKNYWRQLLNAKLITQRKFDNLTKAERGG LSELDKAGFIKRQLVETRQITKHVAQILDSRMNTKYDENDKLIREVKVITLKSKLVSDFRKDFQFYKV REINNYHHAHDAYLNAVVGTALIKKYPKLESEFVYGDYKVYDVRKMIAKSEQEIGKATAKYFFYSNIM NFFKTEITLANGEIRKRPLIETNGETGEIVWDKGRDFATVRKVLSMPQVNIVKKTEVQTGGFSKESIL PKRNSDKLIARKKDWDPKKYGGFDSPTVAYSVLVVAKVEKGKSKKLKSVKELLGITIMERSSFEKNPI DFLEAKGYKEVKKDLIIKLPKYSLFELENGRKRMLASAGELQKGNELALPSKYVNFLYLASHYEKLKG SPEDNEQKQLFVEQHKHYLDEIIEQISEFSKRVILADANLDKVLSAYNKHRDKPIREQAENIIHLFTL TNLGAPAAFKYFDTTIDRKRYTSTKEVLDATLIHQSITGLYETRIDLSQLGGDGGSGPPKKKRKVYPYDVPDYAC

 

最新引用文献:

1、Van Cleemput, J. et al. (2021). CRISPR/Cas9-Constructed Pseudorabies Virus Mutants Reveal the Importance of UL13 in Alphaherpesvirus Escape from Genome Silencing. J Virol. 95(6):e02286-20. doi: 10.1128/JVI.02286-20.

2、Lee, M.H. et al. (2021).  Cellular reprogramming with multigene activation by the delivery of CRISPR/dCas9 ribonucleoproteins via magnetic peptide-imprinted chitosan nanoparticles. Mater Today Bio. 9:100091. doi: 10.1016/j.mtbio.2020.100091.

 

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